GFP和EGFP的区别和产生

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GFP和EGFP分不清楚？今天小编将为大家详细讲解GFP和EGFP的相同和不同之处，以及如何快速观察荧光表达！

GFP绿色荧光蛋白

GFP绿色荧光蛋白，英文全称Green Fluorescent Protein，是一种在蓝光或紫外光激发后发出绿色荧光的蛋白质。

GFP天然存在于维多利亚多管发光水母中，所以也称为野生型GFP。

GFP由238个氨基酸组成。GFP的大小为26.9kDa。GFP因其固有荧光而无需任何辅助分子，是分子生物学中的强工具。荧光是由于蛋白质的连续氨基酸的共价重排而产生的。蛋白质折叠后，主链原子Ser65、Tyr66和Gly67在O2存在下形成高度共轭的平面对羟基苯亚甲基咪唑啉酮发色团。晶体结构研究表明，发色团堆积在分子β桶结构的核心内，可防止其因顺磁性氧、水偶极子或顺反异构化而猝灭。此外，发色团与邻近分子的非共价相互作用增强了其光谱特性。

EGFP增强型绿色荧光蛋白

EGFP增强型绿色荧光蛋白，英文全称Enhanced Green Fluorescent Protein，是野生型GFP的变体。

EGFP具有比GFP更高的发射强度。F64L和S65T这两个突变生成的EGFP在37°C下具有更高的折叠效率。EGFP在490nm处具有单个激发峰，这是由于S65T抑制了395nm峰，因为它调节附近Glu222的电离态。另一方面，F64L提高了37℃下的折叠效率。重要的是，EGFP的密码子序列针对在哺乳动物细胞中的表达进行了优化。

GFP和EGFP的区别

GFP和EGFP的相同之处：

1. GFP和EGFP都属于绿色荧光蛋白，激发后都会发出绿色荧光。

2. GFP和EGFP不需要任何辅助酶/底物、辅因子或基因产物来显示其颜色。因此，两者都被用作分子生物学中基因表达的报告基因。

3. GFP和EGFP与发色团形成经典的β-桶状折叠，包含穿过结构核心的螺旋。

GFP和EGFP的区别：

1. GFP激发光峰值395nm，EGFP激发光峰值488nm。

2. GFP和EGFP被激发后都会发出绿色荧光，但是EGFP的绿色荧光更亮。

3. GFP是从维多利亚水母中分离出来的野生型蛋白质，EGFP是野生型GFP的变体。

如何快速观察GFP和EGFP？

如果同学们想看GFP或EGFP的绿色荧光表达，需要用相应波长的激发光照射含GFP或EGFP的样本：

• 观察GFP用紫外光照射

• 观察EGFP用蓝光照射

下图是LUYOR-3280RB蓝光手电筒照射含GFP的烟草叶片后，观察到的绿色荧光。

使用3280荧光手电筒仅需2步就可快速观察荧光表达：

第一步：戴上荧光观察眼镜

第二步：打开手电筒，照射样本，就可以直接看到荧光啦！

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