用LUYOR-3415RG筛选土豆GFP，代替荧光显微镜

马铃薯作为全球重要的经济作物，绝大多数栽培品种为四倍体，传统育种周期长、效率低。基因编辑技术为马铃薯精准分子育种提供了新路径，但其应用高度依赖高效的遗传转化体系。近期，山西农业大学农科院团队在《生物技术通报》发表研究成果，以试管薯为受体材料，结合GFP可视化筛选标记，成功建立了CRISPR/Cas9介导的四倍体马铃薯高效基因编辑体系，其中青薯9号的基因编辑效率高达82.1%，为马铃薯精准分子育种提供了有力的技术支撑。

长期以来，马铃薯遗传转化存在两大瓶颈：一是试管薯诱导和转化具有强烈的基因型依赖性，不同品种的最适条件差异显著；二是传统抗生素筛选获得的阳性植株，后期仍需通过PCR等技术再次鉴定评估转化效率，工作量大且周期长。

可视化筛选标记基因因其操作便捷、可直接观察的优点，在植物遗传转化效率评估中应用广泛。其中，绿色荧光蛋白（GFP）报告基因可通过荧光显微镜等设备直接观察，实现转基因植株的快速筛选。已有研究证实，GFP报告基因可用于马铃薯农杆菌介导遗传转化的监测和可视化筛选。本研究正是将GFP标记与CRISPR/Cas9技术相结合，旨在建立一套高效且普遍适用的四倍体马铃薯基因编辑技术体系。

农杆菌介导转化与GFP可视化筛选

研究以马铃薯内源基因StuPPO2（GenBank: U22921.1）为靶基因，设计sgRNA靶位点（5′-CCTGCTCATGAAGCTAATGAGGA-3′），构建CRISPR/Cas9敲除载体。载体中由35S启动子驱动Cas9和eGFP表达，U6-26启动子驱动sgRNA表达。

转化流程关键点：

1. 试管薯薄片用GV3101农杆菌悬浮液浸染10分钟

2. 共培养2天后转入含150 mg/L卡那霉素和100 mg/L特美汀的分化培养基

3. 分化出的芽在含50 mg/L卡那霉素的MS培养基中生根

4. 利用LUYOR-3415手持式荧光灯观察根部绿色荧光，直接筛选阳性再生植株