LUYOR-3415RG 在农杆菌侵染烟草叶片 GFP 瞬时表达筛选中的应用

LUYOR-3415RG 在农杆菌侵染烟草叶片 GFP 瞬时表达筛选中的应用

应用背景

在植物瞬时表达系统中，常利用农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）侵染本氏烟（N. benthamiana）叶片，携带 35S::GFP 或融合 GFP 标签的外源基因。传统阳性鉴定依赖 RT-PCR 或荧光显微镜观察，耗时且通量低。利用 LUYOR-3415RG 手持式荧光激发灯（365 nm / 450 nm 双波段） 可在暗室中对侵染后叶片直接进行 无损 GFP 荧光初筛，快速锁定阳性克隆。

实验简程

1. 农杆菌（含 pCAMBIA1300-GFP 等载体）培养至 OD₆₀₀≈0.6–1.0，注射渗透（syringe infiltration）本氏烟下表皮。

   
   

2. 22–28℃ 暗培养 24–72 h。

   
   

3. 暗室中取 LUYOR-3415RG，切换至 365 nm（UV） 档，距叶片 3–8 cm 照射：

   
   

• GFP 阳性：叶肉/叶脉处见明显黄绿荧光（肉眼可见）；

  
  

• 阴性/野生型：仅有极弱叶绿素自发荧光或无特征绿光。

  
  

4. 阳性叶片标记，用于后续蛋白提取 / 共聚焦验证 / PCR 确证。

   
   

结果特点

• 可在侵染后 24–48 h 即见信号，早于表型出现；

  
  

• 同一叶片可多次观察，不破坏组织，后续仍可采样；

  
  

• 对大量转化材料做 初筛（pre-screening），可减少 60–80% 不必要的 PCR/WB 工作量。

  
  

仪器参数

• 型号：LUYOR-3415RG

  
  

• 激发：365 nm（UV）/ 450 nm（Blue），适用于 GFP / RFP 双检

  
  

• 光源：LED 冷光源，短时照射不影响叶片活力

  
  

适用于：本氏烟瞬时表达、转基因烟草 T₀/T₁ 初筛、病毒诱导基因沉默（VIGS）效率评估（GFP 报告）。