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更新时间:2026-06-09
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摘要: 小麦(Triticum aestivumL.)遗传转化周期长、再生困难,对阳性苗的早期筛选至关重要。由于小麦组织富含叶绿素及酚类物质,背景荧光干扰强,传统显微镜观察难度大。本文提出利用LUYOR-3415RG高强度手持荧光灯对小麦T0代再生苗进行GFP标记的快速筛查,显著提高育种效率。
与拟南芥和烟草不同,小麦组织在紫外光激发下会产生强烈的红色/橙色自发荧光(Autofluorescence),这会掩盖微弱的GFP信号。此外,小麦叶片蜡质层厚,普通手电筒光线无法穿透,导致“看着像亮了,其实没亮"。
仪器: LUYOR-3415RG(365nm/450nm 双波段)
方法:
暗适应:将待检小麦组培苗置于黑暗环境30分钟(消耗叶绿素荧光,降低背景噪音)。
高强度激发:使用LUYOR-3415RG的365nm(UV档),紧贴小麦叶片基部或幼嫩叶鞘照射。
信号识别:
真阳性:呈现亮绿色、点状分布,边界清晰,且亮度随激发时间不衰减。
假阳性(自发荧光):呈现弥散的红褐色,亮度随照射时间迅速减弱。
步骤 | 操作细节 | 备注 |
|---|---|---|
取材 | 选取小麦T0代再生苗的新生叶尖或根尖 | 分生组织区信号强 |
预处理 | 暗处理30min,或用75%酒精擦拭叶片表面 | 去除蜡质层反光 |
照射 | LUYOR-3415RG 365nm档,距离3-5cm | 避免直射人眼 |
分选 | 阳性苗移栽,阴性苗淘汰 | 淘汰率可达70%以上 |
在未使用3415RG之前,实验室需要对所有再生苗进行PCR鉴定,单株成本约20元,耗时3天。
使用后一分钟

LUYOR-3415RG凭借其高功率密度,有效克服了小麦组织的背景干扰,是小麦、水稻等单子叶作物转基因筛选的理想工具。