无需切片，直接观察大豆下胚轴与根尖荧光信号

大豆作为全球重要的油料与经济作物，其转基因育种与基因功能研究一直是农业科技领域的焦点。在大豆遗传转化体系中，绿色荧光蛋白（GFP/eGFP）因其直观、灵敏且无放射性的特点，常被用作报告基因以指示外源基因的转化状态。然而，大豆子叶肥大、叶绿素含量高，传统的GFP检测往往需要借助荧光显微镜对切片或提取液进行检测，操作繁琐且具有破坏性。

针对这一痛点，上海路阳推出了LUYOR-3415RG便携式双波长荧光蛋白激发光源。该设备能够输出高强度的440–470 nm蓝光，高效激发大豆组织中的GFP发出明亮的绿色荧光。配合专用黄色滤光眼镜（LUV-50A），研究人员可在温室或大田环境下，对大豆再生苗及愈伤组织进行无损、实时、高通量的阳性株筛选，极大地简化了大豆转基因育种的初筛流程。

一、实验材料

• 待测材料：含GFP报告基因的转基因大豆T₀代再生苗（子叶期至V2期）或T₁代萌发种子。

  
  

• 阴性对照：未转化的受体大豆品种（如Williams 82、中黄13等）。

  
  

• 仪器与耗材：

  
  

• LUYOR-3415RG 双波长荧光蛋白激发光源

  
  

• 配套黄色荧光观察眼镜 LUV-50A

  
  

• 暗室或遮光环境（温室角落、纸箱均可）

  
  

二、筛选操作流程

1. 样品准备

将大豆转基因再生苗或萌发的T₁代种子置于光照培养箱或温室中。大豆GFP表达通常在下胚轴（Hypocotyl）和根部最为明显，因此重点观察这两个部位。

2. 荧光激发与观察

1. 环境布置：关闭室内主光源，营造弱光环境。

   
   

2. 佩戴装备：操作人员佩戴LUV-50A黄色滤光眼镜。

   
   

3. 照射观察：

   
   

• ✅ 阳性株：下胚轴皮层或根尖呈现亮绿色荧光，与周围暗色背景形成强烈反差。（可以找后台工作人员判断）

  
  

• ❌ 阴性株：仅显示暗色或深褐色的叶绿素背景，无绿色光斑。

  
  

• 开启LUYOR-3415RG的蓝光通道。

  
  

• 将光斑对准大豆幼苗的下胚轴或根尖部位，距离保持在15–25 cm。

  
  

• 通过滤光眼镜观察：

  
  

3. 结果记录

利用智能手机加装黄色滤光片，拍摄记录阳性植株。建议对阳性苗进行挂牌标记，随后转入正常的抗性筛选（如草甘膦/草铵膦）或分子鉴定流程。

三、大豆筛选的特殊注意事项

1. 避开子叶干扰：大豆子叶富含叶绿素，自发荧光强，容易掩盖GFP信号。建议重点观察下胚轴和根部，此处GFP信噪比最高。

   
   

2. 愈伤组织筛选：对于正在进行遗传转化的大豆愈伤组织，可在体视镜下直接用3415RG照射，快速剔除未转化或空载体愈伤，减少后期工作量。

   
   

3. 光照控制：由于大豆叶片较大，建议在傍晚或全黑环境下观察，以获得最佳对比度。

   
   

四、小结

LUYOR-3415RG荧光蛋白激发光源为大豆转基因研究提供了一种高效的可视化工具。它不仅解决了大豆因组织致密导致的GFP观察难问题，更实现了从“实验室显微观察"到“田间手持筛选"的跨越，是大豆生物技术与分子育种实验室的理想标配仪器。

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